文|卡卡
编辑|卡卡
《——【·引言·】——》
血小板和微血栓在肠缺血-再灌注损伤的病理生理学中起着关键作用。
机制研究已经确定了凝血途径在调节血小板招募和激活中的作用，内皮下基质在IR损伤中介导血小板活化中的作用，内皮细胞非常容易缺血，其脱离，以及基底板的损伤是在IR损伤后。
本文研究探讨了主要血小板糖蛋白受体在肠道IR损伤后血小板招募和激活过程中的作用，即GPVI、GPIb-IX-V和整合素IIb 3和2 1。
肠缺血再灌注损伤
缺氧是指氧气利用率降低的状态，这可能是由于血红蛋白含量减少或饱和度引起的。
缺血是指血液流向一个组织或器官，导致保持内部结构处于健康状态所需的氧气和营养物质的缺乏。
与缺氧相比，糖酵解能量的产生可以继续进行，缺血会影响糖酵解底物的传递。在缺血组织中，糖酵解底物耗尽后，如三磷酸腺嘌呤ATP后，厌氧能量的产生停止。
这不可避免地会导致糖酵解功能被代谢物的积累所抑制，否则这些代谢物就会被血流清除，缺血往往比缺氧更快地损伤组织。
与肠道IR损伤相关的组织学紊乱
在显微镜下，肠腔或粘膜表面折叠成许多指状绒毛，增加了吸收表面积，以确保足够的营养吸收。
肠道IR损伤不仅降低了整体的吸收能力，而且干扰了粘膜表面的完整性，这导致肠道内衬屏障功能的丧失，从而允许细菌通过上皮表面易位并进入血液。
细菌易位和随后发生的脓毒症是与肠道IR损伤相关的主要临床问题，据报道，44%的儿科患者在小肠移植后出现微生物并发症。
这一事件是肠道IR损伤相关的发病率和死亡率较低的主要原因之一，所以不损害粘膜表面的屏障和吸收功能是非常重要的。
与肠道IR损伤相关的微循环障碍
在粘膜绒毛内，一个中央小动脉向上到达绒毛尖端，然后断裂成一个毛细血管网络，向下流过绒毛，形成一个神经丛，在向上移动的过程中与动脉交换。
这种特殊的微血管解剖结构使得绒毛尖端在低血流量时期非常容易受到损伤，因为氧气在到达绒毛底部之前到达尖端扩散到小静脉。
如果血流受到损害，黏膜绒毛最容易受到损伤，这种微血管解剖学表明，黏膜损伤应主要发生在缺血期。
早期的研究表明，3小时缺血后再灌注1小时产生的黏膜损伤，比无再灌注缺血产生的黏膜损伤更严重，这种现象被称为肠道IR损伤，血流恢复与比缺血单独的更大的损伤相关。
肠红外线损伤后的远端器官损伤
除了局部损伤外，缺血后肠组织的炎症强度可能非常严重，以至于再灌注相关反应也可表现在远端器官，这是肠道IR损伤的常见后遗症，也是实验手术中研究最多的对象之一，因为它占肠道IR损伤后发病率的比例很高。
这些系统性效应主要是通过循环中性粒细胞获得的，当中性粒细胞在受伤的肠道微循环中循环时被“启动”或激活，因此能够在偏远部位诱发损伤。
越来越多的证据表明，肠道IR损伤涉及远程组织损伤，特别是肺和肝。
Simpson和同事证明，在肠道再灌注后4小时内，这两个偏远部位的中性粒细胞积累增加导致了它们的损伤，缺乏中性粒细胞可使肺微血管通透性降低80%，肝损伤降低60%。
有趣的是，在这项研究中，中性粒细胞减少小鼠粘膜绒毛的局部损伤不受影响，这表明除了炎性中性粒细胞外的因素也可能诱导损伤。
白细胞在肠道IR损伤中的作用
白细胞的主要功能是保护身体免受细菌或寄生虫等异物的侵害。白细胞可分为两组不同的多形核白细胞或单核白细胞。
PMN，特别是中性粒细胞，不仅是肠道红外损伤后组织损伤加重的主要参与者，而且是包括心脏、肝脏、肾脏和肺在内的许多其他器官的类似损伤。
再灌注与多种细胞因子的循环水平升高有关，特别是肿瘤坏死因子-（TNF）、白细胞介素1（IL-6）和IL-8、二十烷类白三烯B4（LTB4）和血栓素B2（TxB2）、内皮素1（ET-1）和血小板活化因子。
所有这些都是强大的趋化剂和中性粒细胞的化学激活剂，通过激活局部ec发挥作用。
再灌注的肠道与大量中性粒细胞流入有关，中性粒细胞导致黏膜和微循环屏障功能障碍，并加剧先前缺血发作造成的组织损伤，这些可溶性因子还可以协同缩小毛细管腔，提高血流阻力，以损害微循环内的灌注。
在止血和疾病中的血小板
血小板为盘状细胞，直径在0.5~3μm之间，它们是由在骨髓中发现的前体巨核细胞的细胞质碎片产生的。
循环血小板在血管系统中的主要生理作用是通过血小板栓或血栓的形成来防止血管损伤部位的失血，当过多或不必要的血小板活化和募集发生时，血栓形成的病理生理效应变得明显，从而导致超大血栓的形成，该血栓能够完全封闭损伤血管。
这就消除了损伤部位下游的血液流动，导致细胞和组织死亡，这是导致心肌梗死和中风等心血管并发症的典型潜在机制。
血小板可以招募炎症性白细胞到IR损伤的部位
粘附在内皮上的活化血小板可能通过随后招募炎症白细胞到损伤部位而显著加重EC损伤。事实上，对心脏、肾脏和肝脏的红外损伤的研究表明，在灌注期间微循环中血小板的积累增强活化白细胞的招募，从而加剧炎症反应的强度，ir诱导的白细胞募集可能本质上依赖于血小板与小静脉内皮的初始粘附。
这两个细胞通过血小板选择素和白细胞PSGL-1之间的相互作用相互粘附，所形成的血小板-白细胞聚集物具有阻断微血管和阻断血流的能力，也有充分的文献表明，由于两种细胞类型的特定激活机制，不需要血管前壁相互作用，小的血小板-白细胞聚集物可以在循环中形成。
过氧化氢、超氧化物歧化酶和同型半胱氨酸均在IR损伤过程中展现，在这些相关的细胞激活机制中起着关键作用，虽然这些聚集物主要涉及p-选择素-PSGL-1的相互作用，但其他血小板、白细胞受体和整合素也能够结合这两种细胞类型。
肠IR损伤后，内皮细胞发生剥脱
目前对血小板-内皮下ECM蛋白相互作用，在介导IR损伤后血小板招募中的病理生理作用的研究还较少，受红外损伤损害最严重的微循环成分是EC本身，Massberg和同事在小鼠肠道红外损伤模型中证实了血小板募集。
他们的电子显微镜研究证实了血小板粘附在完整的ec上，但没有检测到明显的内皮细胞剥脱，他们通过隔离和夹紧供应一小段（1-2厘米）空肠的肠系膜动脉血管，仅引起节段性肠缺血。
这种类型的节段性缺血没有引起严重的黏膜损伤、远端器官损伤或显著的发病率，这是与全肠IR损伤的临床和实验模型相关的关键特征，损伤可能没有严重到导致内皮细胞丢失和ECM暴露。
实验材料
1.抗体
2.常用材料
3.细胞分离制备
4.小鼠血小板分离术
5.血小板的CFSE标记
6.小鼠心脏内皮细胞（MuCEC-1）培养
诱导肠道IR损伤
动物被转移到培养皿中，并沿着腹横肌线进行中线腹侧孔切开术，这是一种在左右腹直肌之间发现的无血管纤维结构。
小肠空肠近端或回肠远端轻轻摘除，用湿润纸巾保持原位，使用组织纸而不是手术夹来限制损伤的数量，空肠的定向方式允许供应该节段的肠系膜小动脉的一定长度被平坦地放置在培养皿表面。
通过对肠系膜上动脉应用非创伤性血管夹15、30、45或60分钟，引起小肠缺血，这使得下十二指肠、空肠和回肠出现缺血，在用于活体成像的4小时再灌注期间并没有导致死亡。
从肠道组织内的苍白或颜色的变化可以看出已引起缺血的视觉证据，取出钳子重新灌注小肠，并立即准备将动物侧卧在培养皿中进行活体监测。
肠缺血-再灌注损伤后血小板监测的体内模型的开发和优化
在IR损伤后的多个器官的微循环中观察到血小板的补充，在胰腺红外线损伤期间，血小板消耗的有益作用已经被描述过，大多数证明血小板在IR损伤中的作用的研究已经描述了血小板上皮细胞相互作用的性质和分子决定因素。
马斯伯格和他的同事提供了血小板在小鼠肠道红外损伤中的作用的第一个证据，在体内，他们观察到供体血小板通过一种依赖于内皮细胞而不是血小板的机制滚动或牢固地粘附于缺血后激活的内皮细胞上，这些研究是在供应SI的大肠系膜和粘膜下小动脉中进行的。
缺血的持续时间会影响血小板的招募吗？
实验性肠道红外线损伤可能是致命的，因此与高死亡率相关，特别是当它涉及到整个肠道时，大多数研究集中在节段性肠缺血，即供应一小段（1-2cm）的血管闭塞。
这不是一个常见的临床事件，在大多数情况下，缺血损伤的是整个SI，为了确定在活体观察期内不会导致死亡的总红外损伤的方案，我们对20-25g C57Bl/6小鼠进行了不同时期缺血后4小时再灌注的实验。
在较长时间的再灌注（4小时）内，随着损伤程度的逐渐恶化，可以监测血小板的情况下，通过夹紧肠系膜上动脉来实现肠缺血。